• 1、求大師們詳解：elisa回收實驗怎么做
• 2、實驗中樣品的回收率怎么計算

1、求大師們詳解：elisa回收實驗怎么做

elisa做回收率就是給自己找麻煩
回收實驗的評估及數(shù)據(jù)處理方法
操作過程按說明書操作
1. 實驗樣本的基本要求和制備方法
（1）選擇合適濃度的常規(guī)檢測樣本,分為體積相同的3-4份.
（2）在其中2-3份樣本中加入不同濃度相同體積的待測物標(biāo)準(zhǔn)液制備待回收分析樣本,加入體積小于原體積的10%,制成2-3個不同加入濃度的待回收分析樣本,計算加入的待測物的濃度.
（3）在另一份樣本中加入同樣體積的無待測物的溶劑,制成基礎(chǔ)樣本.
如：
①基礎(chǔ)樣本血清：血清1ml（含被測物濃度為X1）+雙蒸水(最好用不含被測物的基質(zhì)液)0.1ml;
基礎(chǔ)樣本濃度＝X1/(1+0.1)
②回收樣本1:血清1ml+0.1ml標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度X2）; 加入濃度為:X2/(1+0.1) 低
③回收樣本2：血清1ml+0.1ml標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度X3）; 加入濃度為:X3/(1+0.1) 中
④回收樣本3：血清1ml+0.1ml標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度X4）; 加入濃度為:X4/(1+0.1) 高
2.實驗過程
用待評價系統(tǒng)對待回收分析樣本和基礎(chǔ)樣本進(jìn)行測定,通常對樣本進(jìn)行3次重復(fù)測定,計算均值,取其均值進(jìn)行下述計算.
 測定濃度加入濃度 回收濃度 回收率%
基礎(chǔ)樣本
分析樣本1
分析樣本2
分析樣本3
3.數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報告
（1）加入濃度C=標(biāo)準(zhǔn)液濃度×[標(biāo)準(zhǔn)液加入體積/(樣本體積+標(biāo)準(zhǔn)液體積)]
（2）計算回收率：
回收率n = (測定待回收分析樣本濃度均值-測定基礎(chǔ)樣本濃度均值) / 加入濃度
（3）計算平均回收率：
平均回收率 = (樣本1的回收率+樣本2的回收率+樣本3的回收率) / 3
（4）計算每個樣本回收率與平均回收率的差值：
每個樣本回收率與平均回收率的差值＝回收率n－平均回收率
如差值超過±10%,應(yīng)查找原因并糾正,重新進(jìn)行評估.
（5）計算比例系統(tǒng)誤差：
比例系統(tǒng)誤差 = |100% - 平均回收率| 一般小于5%
（6）結(jié)果評估：
結(jié)果至少應(yīng)滿足相關(guān)國際及國家標(biāo)準(zhǔn),同時滿足臨床需求.
注意事項: elisa做回收率時應(yīng)注意低濃度避免前滯效應(yīng)的發(fā)生.高濃度應(yīng)避后滯效應(yīng)(鉤狀效應(yīng))
個人見意義基礎(chǔ)血清濃度不要太高.否則做不到理想值.理論上來說越低越好做

2、實驗中樣品的回收率怎么計算

空白加標(biāo)回收：在沒有被測物質(zhì)的空白樣品基質(zhì)中加入定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，按樣品的處理步驟分析，得到的結(jié)果與理論值的比值即為空白加標(biāo)回收率。 　　樣品加標(biāo)回收：相同的樣品取兩份，其中一份加入定量的待測成分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；兩份同時按相同的分析步驟分析，加標(biāo)的一份所得的結(jié)果減去未加標(biāo)一份所得的結(jié)果，其差值同加入標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的理論值之比即為樣品加標(biāo)回收率。 　　加標(biāo)回收率的測定, 是實驗室內(nèi)經(jīng)常用以自控的一種質(zhì)量控制技術(shù). 對于它的計算方法, 給定了一個理論公式： 　　加標(biāo)回收率= (加標(biāo)試樣測定值－試樣測定值)÷加標(biāo)量×100%.

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